Microarray de proteínas

Título: Identificación de nuevos autoanticuerpos en pacientes diabéticos tipo 1 utilizando una proteína de microarrays de alta densidad.

En este caso, los microarrays de proteínas plataforma versión 5.0 contienen manchas duplicadas de 9480 proteínas humanas N-terminal de glutation S-transferasa-etiquetados impresos sobre un portaobjetos de nitrocelulosa; estos se conocen como moléculas sonda y son marcadas con un colorante fluorescente. Con este método se seleccionaron 2 nuevos autoanticuerpos, seguido de la tinción de inmunofluorescencia de páncreas para investigar la expresión de autoantígenos en dicho tejido y por último la prueba de validez por ELISA.

Arrays de proteínas

Bibliografía:

Kyung B, Chae S, Kim K, Jueng M, Kim E, Heon S,... y Soo K. (Internet). 2014. (actualizado 2015, citado 31 Mayo de 2015). Disponible en: http://diabetes.diabetesjournals.org/content/63/9/3022.full

Imagen tomada de:
http://contenidos.institutoroche.es/images/nanoproteomica_figura2.jpg

Análisis de PCR

Título: Enterovirus ARN se encuentra en las células mononucleares de sangre periférica en la mayoría de niños diabéticos tipo 1

Objetivos:

1. Detectar EV-ARN en las células mononucleares de sangre periférica y estudiar la aparición de infecciones EV en una cohorte de 1 año de diagnóstico reciente de niños diabéticos tipo 1 y sus sujetos de control emparejados.

2. Estudiar la propagación de la infección EV intrafamiliar mediante el análisis de los hermanos de los niños diabéticos de tipo 1

Tipo de muestra: sangre periférica (muestra compleja)

Ácido nucleico: ARN viral

Pasos de extracción: Kit QIAamp Viral RNA Mini

Gen a amplificar: genes DRB1 y DQB1

Tipo de PCR: RT-PCR

Pasos PCR:

D        94 grados Centígrados        30 s             40 ciclos

H        45 grados Centígrados        30 s

E        72 grados Centígrados        60 s

Visualización: EFO

Bibliografía:

Yin H, Berg A, Tuvemo T y Frisk G. (Internet). 2002 (actualizado 2015; citado 31 de Mayo de 2015). Disponible en: http://diabetes.diabetesjournals.org/content/51/6/1964.full

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http://www.cultek.com/index.asp?p=noticia&id_new=43

Pruebas de tamizaje

Prueba de tamizaje

Consiste en detectar anticuerpos de ácido glutámico descarboxilasa (GADAs) y anticuerpos de antígeno-2 de los islotes (IA-2As); sin embargo estas pruebas no son recomendadas debido a que no existe un tratamiento aceptado para los pacientes que son diagnosticados en la fase asintomática.

Pruebas confirmatorias

• Prueba de hemoglobina glicosilada (A1C): si es igual o mayor a 6.5%.
• Prueba de azúcar en la sangre al azar: si es igual o mayor a 200 mg/dl.
• Prueba de azúcar en la sangre en ayunas: si es igual o mayor a 126 mg/dl.

Valores de hemoglobina glicosilada

Bibliografía:

Patel, P y Macerollo, A. (Internet). Ohio; 2010 (actualizado 2015; citado 24 de Mayo de 2015). Disponible en: http://www.aafp.org/afp/2010/0401/p863.html

American Diabetes Association. (Internet). 2002 (actualizado 2015; citado 24 de Mayo de 2015). Disponibleen: http://care.diabetesjournals.org/content/25/suppl_1/s21.full

Canadian Diabetes Association Clinical Practice Guidelines Expert Committee. (Internet). Canadá; 2013 (actualizado 2015; citado 24 de Mayo de 2015). Disponible en: http://guidelines.diabetes.ca/browse/Chapter4

Khardori, R (Internet). (Internet). Griffing G; 2015 (actualizado 2015; citado 24 de Mayo de 2015). Disponible en: http://emedicine.medscape.com/article/117739-workup

Mayo Clinic (Internet). 2014 (actualizado 2015; citado 24 de Mayo de 2015). Disponible en: http://www.mayoclinic.org/diseases-conditions/type-1-diabetes/basics/tests-diagnosis/con-20019573

Imagen tomada de:

https://tono7.files.wordpress.com/2007/07/cardback_grande.jpg

Alteraciones en la traducción

La reacción autoinmunitaria en contra de las células b del páncreas está dada porque falla el siguiente proceso: el mRNA de las cadenas a y b que forman el CMH-II se traduce en los ribosomas del REr y en el lumen de este organelo se ensamblan. El CMH-II se une a la cadena invariante que protege el sitio que ocupará el antígeno, favorece su salida del retículo y lo lleva a los endosomas que tienen los péptidos antigénicos. Finalmente, la vesícula que transporta el CMH-II se fusiona con la membrana celular y emerge el complejo CMH-II unido al péptido antigénico.

Expresión del complejo peptídico MHC II en la superficie celular

Bibliografía:

Universidad de Granada (Internet). España: Enrique Iáñez;  1999 (2015; citado el 10 de Mayo de 2015). Complejo Mayor de Histocompatibilidad MHC. Disponible en: http://www.ugr.es/~eianez/inmuno/cap_08.htm

Universidad de Granada (Internet). España: Enrique Iáñez; 1999 (2015; citado el 10 de Mayo de 2015). Procesamiento y presentación de antígenos. Disponible en: http://www.ugr.es/~eianez/inmuno/cap_09.htm

Vega Gloria. Complejo Mayor de histocompatibilidad. Medigraphic (Internet). 2009 (citado el 10 de Mayo de 2015); Vol 52 No 2: 2-3. Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/facmed/un-2009/un092j.pdf

Imagen tomada de:

http://ladiabetes.webnode.com/genetica-y-metabolismo/mhc/

Alteraciones en la transcripción

En la activación transcripcional de los genes MHC II se han identificado 4 elementos reguladores presentes en los promotores de estos genes; de los cuales, el elemento X debe unirse al transactivador de clase II (CIITA) para incrementar la estabilidad de esos complejos y potenciar la iniciación de la síntesis de mRNA. Además, la expresión de MHC II esta regulado por citokinas, es así que IFN γ induce la expresión de CIITA e incrementa la expresión de MHC II; sin embargo, puede hacerlo incluso en células no presentadoras de antígenos, entre ellas las células beta del páncreas.

Bibliografía:

Acta Médica Colombiana (Internet). Colombia: Vásquez G, Patiño E, García L y Barrera L; 2011 (actualizado 2015; citado 17 Mayo de 2015). Disponible en: http://www.actamedicacolombiana.com/anexo/articulos/02-2001-06.htm

Universidad de los Andes Venezuela (Internet). Venezuela: Cova A; 2015 (actualizado 2015; citado 17 Mayo de 2015). Disponible en: http://webdelprofesor.ula.ve/medicina/jacova/docencia/MHC_guia.pdf

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http://webdelprofesor.ula.ve/medicina/jacova/docencia/MHC_guia.pdf

Alteraciones epigenéticas

Los microRNAs son pequeñas moléculas que regulan negativamente la expresión génica y han estado implicados en la destrucción autoinmune de las células B del páncreas en la DM 1, al causar alteraciones en las células T que son reguladoras de la enfermedad autoinmune. 

Se han medido los cambios de la expresión de miRNAs en las células T reguladoras en individuos con DM 1 y se encontró que  miR-510 fue significativamente sobre regulado, y que miR-191 y miR-342 fueron poco regulados, en comparación con los miRNAs de las células T de individuos sanos.

                                           Mecanismo de acción de un microRNA

Funcionamiento de un microRNA

Bibliografía:

Fernández S, Taft R y Mattickk J. MicroRNAs in B-cell biology, insulin resistance, diabetes and its complications. Diabetes (Internet). 2011 (citado 2 de Mayo de 2015); Volumen 60; páginas 1-5. Disponible en: http://diabetes.diabetesjournals.org/content/60/7/1825.full.pdf+html

Imagen tomada de:

http://www.longevinex.com/articles/wp-content/uploads/microRNA.jpg

Video tomado de:

https://www.youtube.com/watch?v=_gtRMV0pn80